Инфекционные заболевания представляют угрозу для человечества. Они способны годами разрушать организм без внешних проявлений. Инфекции запускают изменения в клетках и тканях – развиваются воспаления, образуются атипичные клетки. ПЦР анализ относительно недавно стал использоваться в практической медицине, но завоевал славу самого результативного. С его помощью можно констатировать заражение патологическими микробами задолго до проявления клинических симптомов инфекционного заболевания.
Общие сведения о методе
Методика ПЦР (полимеразной цепной реакции) разработана микробиологом Кери Мюллисом. В 1993 ученый получил за нее Нобелевскую премию. С тех пор метод стали активно внедрять в работу медицинских лабораторий, как самый перспективный, точный и универсальный способ обнаружения различных инфекционных агентов. ПЦР продолжают использовать и в научных целях, для исследования малоизученных микроорганизмов.
Методика базируется на законе природы и микробиологии – все живые существа имеют уникальную ДНК или РНК, состоящую из цепочек нуклеотидов, расположенных в особой последовательности. Зная ее, можно выявить любой микроорганизм. Единственная проблема – его необходимо найти.
В организме человека прячутся несметные количества микроскопических организмов. Иногда заражение происходит при контакте с единицами микробов. До создания ПЦР-диагностики выявить их было практически невозможно.
Метод подразумевает создание условий для усиленной репликации (деления) чужеродных фрагментов ДНК. Чем их больше – тем проще определить вид возбудителя. Для проведения анализов применяют специальное оборудование и ферментные системы. В комплексе они обеспечивают быстрое размножение искомой ДНК до того момента, пока ее можно будет обнаружить.
Что определяет
Сферы применения ПЦР-диагностики чрезвычайно обширны. По описываемому принципу можно найти любой микроб. Будь то грибок, бактерия, вирус или простейшие. Анализ используют для выявления:
- всех типов вируса гепатита,
- вирусов герпеса,
- микроорганизмов, провоцирующих половые инфекции (уреоплазма, гарднерелла, микоплазма, трихомонады, хламидии),
- ВИЧ,
- микобактерии туберкулеза,
- хеликобактер пилори,
- грибков,
- энцефалитного клеща,
- листерий,
- ВПЧ.
Характерной особенностью для ПЦР выступает возможность выявления единичных фрагментов генетического материала возбудителя, на что не способны другие типы лабораторной диагностики.
Как выявляют инфекцию
Для проведения ПЦР-диагностики необходим биоматериал – биологическая жидкость или ткань, в которой (теоретически) «селятся» микроорганизмы сразу после попадания в человеческое тело. Используют мокроту, частички эпителиальной ткани, соскобы со слизистых оболочек (мазки), кровь, мочу, мокроту, выделения из желез.
Сразу после забора биоматериал помещают в специальную стерильную транспортную среду. Это важно для профилактики обсеменения другими микроорганизмами из воздуха. К полученному материалу добавляют ферментные системы. Они состоят из специфических цепочек ДНК или РНК, способных «распознать» родственные им фрагменты. Обработанный материал помещают в специальное оборудование, где он выдерживается на протяжении определенного времени при максимально благоприятном температурном режиме.
После смешивания с ферментной системой, инфекционные фрагменты ДНК восстанавливают целостность и приобретают способность к делению. Размножение материала происходит в геометрической прогрессии.
Средний цикл цепной реакции занимает около 3 минут. Это значит, что спустя 3 часа пребывания в устройстве, в биоматериале будет то количество цепочек ДНК или РНК, которое позволит найти и идентифицировать возбудителя.
Какие результаты получит пациент
ПЦР-диагностика на любую инфекцию дает 2 варианта результатов – положительный или отрицательный. Анализ только подтверждает или исключает наличие чужеродного агента в организме. То есть, опираясь на результаты диагностики, врач может констатировать или опровергнуть факт заражения. Судить о давности развития инфекции или интенсивности деления микроорганизмов не приходится. Для этого применяются ИФА-тесты, базирующиеся на выявлении и подсчете количества антител, сформировавшихся при иммунном ответе.
Поскольку ПЦР-диагностику проводят для выявления патогенных микроорганизмов, факт заражения означает только одно – будет проведено дообследование и назначено лечение. Отрицательный результат также однозначен – организм пациента не пребывал в контакте с инфекцией.
Расшифровывать результат анализа должен врач. Пребывание инфекции в теле не всегда означает болезнь. Возбудитель может сосуществовать с человеком латентно (скрыто) и никак не беспокоить «хозяина».
О недостатках и преимуществах
Метод полимеразной цепной реакции считается самым прогрессивным способом лабораторной диагностики и используется практически во всех сферах медицины. Способствует тому множество преимуществ методики.
Высокие показатели точности и чувствительности
ПЦР дает достоверные результаты. Точность метода на сотые доли превышает 99.9%. Мизерную часть сомнений можно оставить на случай форс-мажора в лаборатории, что бывает крайне редко. Более того, в отличие от остальных методов диагностики, ПЦР срабатывает практически сразу после заражения. Вероятность ложноотрицательного результата при ВИЧ присутствует на протяжении 2 недель после контакта с носителем инфекции (усредненный показатель). Однако даже если возбудитель не активизировался сразу, а начал бессимптомно «жить» в организме, ПЦР его «увидит».
Специфичность
Полимеразная цепная реакция подразумевает выявление только искомого возбудителя инфекции. Для этого используются высокоспецифичные ферментные системы, способные активизировать отдельные гены микроорганизмов. При исследовании мазков со слизистых, не учитываются показатели условно-патогенной микрофлоры, а находятся только болезнетворные микробы.
Методика постоянно совершенствуется. Некоторые лаборатории предлагают провести ПЦР диагностику сразу на несколько болезнетворных микробов. Это добавляет к специфичности анализа характеристику универсальности.
С данной целью применяют унифицированные ферментные системы, способные запустить деление нескольких типов инфекции. Наиболее востребованы комплексные анализы в урологии и гинекологии. В данных сферах часто встречаются опасные инфекции, способные вызвать необратимые изменения в организме инфицированного человека. Мазки из урогенитального тракта исследуют одновременно на 3, 5, 9 и даже 13 микроорганизмов. Однократный забор биоматериала для изучения, позволяет выявить сразу все микробы, которые потенциально могут присутствовать в исследуемой среде.
Скорость
Результаты ПЦР-тестов обычно готовы на следующий день после забора биоматериала. Некоторые лаборатории предоставляют их уже через несколько часов (в печатном, устном, электронном форматах). Сроки готовности результатов зависят от технических возможностей медицинского учреждения. Чем оно «богаче», тем лучше и современнее технологическая база и, тем быстрее готовятся результаты анализов.
Недостатки метода
Несмотря на все «дифирамбы» у методики есть и недостатки. По сравнению с количеством и важностью достоинств, они менее существенны.
Первый недостаток кроется в стоимости. Анализ нельзя отнести к дорогим или доступным. Все зависит от того, каким оборудованием пользуется лаборатория. Технологическое оборудование для проведения ПЦР-анализов дорогостоящее. Потребуются специальные агрегаты, очистительные приспособления для воздуха и биоматериала, устройства для его хранения, транспортировки, ферментные системы. Лаборатория понесет затраты на обучение медицинского персонала. При заборе проб важно обеспечить их стерильность, минимизировать риск обсеменения в процессе транспортировки и исследования. Для этого медицинский персонал изучает четкие инструкции. Только после специального обучения сотрудников допускают к работе с аппаратурой.
Специалисты рекомендуют сдавать ПЦР-анализы в лабораториях с многоуровневой проверкой качества результатов. Это сводит риск ошибки почти к нулю.
Забор материала и его первичную обработку перед аппаратным исследованием проводит человек, поэтому нельзя исключаться человеческий фактор ошибки. Вероятность контакта минимальна и даже исключена, если забор выполняет обученный человек. Однако сотые доли риска нарушений все равно присутствуют.
Когда нужно проводить ПЦР-диагностику
Сдавать биоматериал для анализа необходимо по рекомендации лечащего или семейного врача. Если доктор подозревает пребывание пациента в очаге инфекции или контакт с ее носителем, он посоветует незамедлительно сдать анализ. Заблаговременное обследование поможет диагностировать инфекцию как можно раньше.
В частных лабораториях можно сдать целые «панели» ПЦР-анализов без назначения врача. Пациенты могут обследоваться по собственному желанию (анонимно), а также в профилактических целях. Ответственный подход к своему здоровью приветствуется, однако расшифровкой результатов диагностики должен заниматься специалист.
Врачи рекомендуют сдавать некоторые анализы на регулярной основе – ВИЧ, сифилис, гепатиты. Заражение может произойти незаметно. В начале развития заболевания симптомы возникают не всегда. Чем раньше выявить возбудителя, тем скорее можно начать лечение и предотвратить неисправимый ущерб для здоровья.
Комплексную ПЦР-диагностику можно (и нужно) проходить на этапе планирования беременности, после незащищенных сексуальных контактов (с малоизвестной личностью, при изнасиловании), пребывания в местах, где зарегистрирована вспышка инфекции.
ПЦР – современный и качественный способ выявления инфекционных заболеваний. Анализы этого типа назначают перед определением окончательного диагноза, при постановке на диспансерный учет, перед проведением хирургических вмешательств. Чтобы получить достоверные результаты нужно подготовиться. Кровь сдают утром натощак, мазки урогенитального тракта – при условии 3 дней полового воздержания, мокроту и частицы эпителия – в стерильных лабораторных условиях.
(Пока оценок нет)
Загрузка...
